誘導体化なしのダイレクトで迅速な乳児用製粉乳中アミノ酸分析

• 非誘導体化アミノ酸を直接分析するための簡単なシングルステップサンプル前処理。
• 無極性、極性、正荷電、および負荷電のアミノ酸をわずか10分間で同時分析。
• 適切に設計されたグラジエントは、夾雑成分を目的化合物から分離します。

栄養所要量を確実に満たすためには、乳児用調製粉乳中の遊離アミノ酸の正確な測定のための信頼できる分析法が必要です。プレカラム誘導体化と逆相LC分析は典型的なアプローチです。クロマトグラフィーの保持がなく、遊離アミノ酸の感度が悪いために誘導体化が必要なのです。しかし、これらの方法は多くの場合、時間と労力を要します。C18カラムで非誘導体化アミノ酸の保持を改善するために、イオン対試薬としての過フッ素化酸を使用するのはまた別の一般的な手法ですが、この方法は、クロマトグラフィーシステムおよび質量分析計に悪影響を与える可能性があります。

ここに示すより簡単な手法では、非誘導体化アミノ酸は、MS/MS検出器とRaptor Polar Xカラムを用いて、シングルステップのサンプル前処理手順に従って直接測定することができます。Raptor Polar Xカラムは、様々な分析対象化合物の同時分析に必要なバランスのとれた保持をもたらすハイブリッド固定相ケミストリ(HILICとイオン交換)を備えています。ここで示したように、非極性、極性、正荷電、および負荷電の側鎖を有する非誘導体化アミノ酸は、適切に保持され、10分間のグラジエントを使用して迅速に溶出されました。このグラジエントはまた、分析種からアミノ酸系の試料に存在する夾雑物を分離し、メソッドに頑健性を加えています。このメソッドに従うことにより、高価な誘導体化キットを含む時間と労力のかかるサンプル前処理手順が、簡単なタンパク質沈殿と得られた抽出物の直接分析に置き換えられます。Raptor PolarXカラムで非誘導体化アミノ酸を直接分析すると、迅速で容易なワークフローで優れた結果が得られるため、従来の方法に代わる有益な方法と言えるでしょう。

	Peaks	tR (min)	Precursor Ion	Product Ion
1.	Tryptophan	1.17	205.07	146.08
2.	Phenylalanine	1.26	166.13	120.10
3.	Leucine	1.41	132.13	86.10
4.	Isoleucine	1.55	132.13	86.10
5.	Methionine	1.62	150.07	104.10
6.	Tyrosine	1.69	182.10	136.08
7.	Taurine	1.91	126.07	108.07
8.	Valine	1.98	118.13	72.11
9.	Proline	2.29	116.13	70.09
10.	Alanine	3.00	90.03	44.10

	Peaks	tR (min)	Precursor Ion	Product Ion
11.	Threonine	3.12	120.13	74.08
12.	Glycine	3.62	76.10	30.11
13.	Glutamine	3.87	147.13	84.07
14.	Serine	3.93	106.07	60.09
15.	Asparagine	4.08	133.13	74.07
16.	Arginine	4.47	175.17	70.09
17.	Histidine	4.66	156.07	110.16
18.	Lysine	4.97	147.13	84.13
19.	Glutamic acid	5.89	148.10	84.10
20.	Cystine	6.10	241.13	152.00
21.	Aspartic acid	7.12	134.07	74.06

Column	Raptor Polar X (cat.# 9311A12)
Dimensions:	100 mm x 2.1 mm ID
Particle Size:	2.7 µm
Temp.:	30 °C
Standard/Sample
Diluent:	20:80 Water:acetonitrile, 0.01 N HCl
Conc.:	Endogenous amino acids
Inj. Vol.:	5 µL
Mobile Phase
A:	Water, 0.5% formic acid
B:	Mobile Phase B: 9:1 Acetonitrile:20 mM ammonium formate in water (pH 3.0) (The ammonium formate concentration is 20 mM relative to the total volume of mobile phase B. See preparation notes for instructions on diluting a 200 mM aqueous starting solution.)
	Time (min) Flow (mL/min) %A %B 0.00 0.5 12 88 3.50 0.5 12 88 8.00 0.5 70 30 8.01 0.5 12 88 10.0 0.5 12 88

Detector	MS/MS
Ion Mode:	ESI+
Mode:	MRM
Instrument	UHPLC
Sample Preparation	A 200 µL aliquot of protein hydrolysate formula (Similac ALIMENTUM) was mixed with 800 µL of acetonitrile and 10 µL of 1 N HCl. After centrifugation at 4000 rpm for 5 minutes, the supernatant was diluted 20-fold with 20:80 water:acetonitrile (0.01 N HCl) and injected for analysis.
Notes	Mobile Phase B Preparation: To make 500 mL of mobile phase B, measure ~45 mL of water into a small beaker and add 1 mL of 10 M ammonium formate solution. Adjust pH to 3.0 by adding formic acid and then bring the volume to 50 mL with water. Combine this 50 mL ammonium formate solution (pH 3.0) with 450 mL of acetonitrile to complete the preparation.

Download PDF