Analisi ad alto rendimento delle micotossine nell’olio di CBD di cannabis con una semplice purificazione del campione e un’eccellente sensibilità LC-MS/MS

• Analizza un maggior numero di campioni per turno con un ciclo rapido della durata totale di soli 3 minuti.
• Rimuovi le interferenze della matrice in un unico step purificando il campione con le cartucce SPE Resprep.
• Ottieni un’ottima sensibilità in matrice fino a livelli di 2 ng/g con la strumentazione tradizionale.Fast, 3-min total cycle time lets you analyze more samples per shift.

Le aflatossine e le ocratossine destano sempre più preoccupazione nell’industria della cannabis, poiché questi metaboliti fungini secondari, se ingeriti, possono causare gravi malattie e talvolta la morte. Le colture possono subire l'attacco da parte dei funghi a partire dal seme fino allo stoccaggio, quindi le possibilità di contaminazione sono molteplici. Pertanto, per tutelare la salute dei consumatori e garantirne la sicurezza, emerge l’esigenza di effettuare dei test per individuare la presenza di micotossine sia nelle materie prime vegetali sia nei prodotti finiti a base di cannabis. L’analisi delle micotossine nell’olio di cannabis è particolarmente critica perché i lipidi presenti nel campione possono generare interferenze isobare della matrice, oltre a provocare una soppressione ionica che può ridurre l’accuratezza, soprattutto a livello di tracce.

Per la preparazione del campione nelle analisi delle micotossine nella cannabis vengono comunemente impiegate le colonne di immunoaffinità (IAC). Tuttavia, le IAC contribuiscono in modo significativo alla complessità generale del metodo, ai tempi e ai costi associati a questo tipo di analisi. I metodi IAC richiedono una procedura elaborata, in quanto sono necessarie numerose fasi di condizionamento e lavaggio. Inoltre, dato che le colonne di questo tipo sono tossino-specifiche, i laboratori devono utilizzare più IAC per poter analizzare tutte le micotossine di interesse.

In questo studio, come alternativa alle IAC, è stato sviluppato un semplice metodo di purificazione attraverso le cartucce SPE Resprep, applicato agli oli di CBD ad alto contenuto lipidico. Gli eccellenti risultati cromatografici ottenuti sia con le aflatossine sia con le ocratossine, persino a livelli di 2 ng/g, hanno dimostrato che questa tecnica semplificata di preparazione del campione ha effettivamente rimosso le interferenze lipidiche. La purificazione del campione SPE è stata associata a una rapida analisi LC-MS/MS effettuata utilizzando una colonna Raptor bifenilica. Grazie alla polarizzabilità e alla selettività unica della colonna Raptor bifenilica, tutti gli analiti target sono stati separati efficacemente con una veloce analisi della durata di soli 3 minuti, confermando la superiorità di questo metodo rispetto alle colonne IAC per un’analisi ad alto rendimento delle micotossine nell’olio CBD di cannabis.

	Peaks	tR (min)	Precursor Ion	Product Ion 1	Product Ion 2
1.	Aflatoxin G2-13C17	1.340	348.3	330.3	-
2.	Aflatoxin G1-13C17	1.576	346.3	257.3	-
3.	Aflatoxin B2-13C17	1.703	332.3	303.3	-
4.	Ochratoxin A	1.824	404.3	239.1	358.3
5.	Ochratoxin A-13C20	1.825	424.3	250.2	-
6.	Aflatoxin B1-13C17	1.947	330.3	301.4	-

Column	Raptor Biphenyl (cat.# 9309A52)
Dimensions:	50 mm x 2.1 mm ID
Particle Size:	2.7 µm
Pore Size:	90 Å
Guard Column:	Raptor Biphenyl EXP guard column cartridge 5 mm, 2.1 mm ID, 2.7 µm (cat.# 9309A0252)
Temp.:	35 °C
Standard/Sample
Diluent:	45:55 Water:Methanol
Inj. Vol.:	5 µL
Mobile Phase
A:	Water, 2 mM ammonium formate, 0.1% formic acid
B:	Methanol, 2 mM ammonium formate, 0.1% formic acid
	Time (min) Flow (mL/min) %A %B 0.00 0.7 35 65 2.00 0.7 10 90 2.01 0.7 35 65 3.00 0.7 35 65

Detector	MS/MS
Ion Mode:	ESI+
Mode:	MRM
Instrument	UHPLC
Sample Preparation	0.25 g of commercially available hemp-derived CBD oil was weighed into a 2 mL vial. A working internal standard was prepared using 13C labeled analogs at a concentration of 250 ng/mL in methanol. 10 µL of the working internal standard was aliquoted into the sample followed by vortexing for 10 seconds at 3000 rpm. 1 mL of 45:55 H2O:MeOH was added to the sample. The sample was vortexed for 30 seconds at 3000 rpm. The sample was then centrifuged at 3000 xg for 5 min at 10 °C. 750 µL of the supernatant was transferred to a conditioned (1 mL 45:55 water:methanol) Resprep bonded reversed phase SPE cartridge (Restek cat.# 26030). The sample was pulled through under vacuum into an autosampler vial for LC-MS/MS analysis.

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