Troubleshooting LC - Traînées de pic en HPLC : comment y remédier ?

Transcription

Merci de nous rejoindre pour un nouveau "conseil Restek". Nous allons aborder le problème des traînées de pics lors des analyses par LC et proposer des solutions pour surmonter cette difficulté. Nous savons tous que les trainées de pics peuvent avoir différentes origines, notamment les interactions secondaires avec les silanols, la contamination, la surcharge de la colonne... la liste est longue. Intéressons-nous aux interactions secondaires avec les silanols, et aux moyens de les atténuer pendant la phase de développement. Lorsque je commence à examiner les trainées de pics et à chercher ce qui pourrait aider à les réduire, je commence par observer toutes les conditions analytiques que j’ai mises en place dans ma méthode.  

Une fois passées en revue les phases mobiles que j’ai choisies, le gradient, les températures, etc., je m’attarde un peu plus sur la structure des analytes. Si je regarde les analytes, la charge positive des composés, concrètement, tout ce qui peut contenir une fonction amine, comme un médicament faiblement basique, peut interagir avec la charge négative des silanols résiduels présents à la surface de la silice.  

C’est cette interaction qui crée les trainées de pics. Une façon simple de contourner ce problème est d’ajouter un tampon dans vos phases mobiles. Lors des analyses LC-MS habituelles, nous ajoutons déjà un acide aux éluants aqueux et organiques de nos phases mobiles. L’ajout de sels complémentaires, comme le formiate d'ammonium dans l’acide formique, peut vraiment aider à réduire certaines de ces interactions avec les silanols.  

En effet, la charge positive du sel tampon que nous ajoutons peut interagir avec la charge négative des silanols à la surface de la silice et créer cette interaction. Elle va empêcher votre analyte d’interagir avec la surface de la silice. Le mécanisme de rétention primaire est provoqué par la phase stationnaire que vous avez choisie. Il ne faut pas oublier d’ajouter les tampons à la fois dans les éluants aqueux et organiques pendant les analyses en mode gradient, afin d’atténuer les traînées à la fois sur les pics à élution précoce et tardive.  

La prochaine fois que vous avez des trainées de pics pendant l’analyse de petits médicaments basiques, essayez d’ajouter un tampon à la phase mobile pour vous en débarrasser.

Nous vous remercions d’avoir visionné ce “conseil Restek”.